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以下是?人補(bǔ)體因子H(CFH)ELISA試劑盒?的實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)核心內(nèi)容:
BS-0638人補(bǔ)體因子H(CFH)ELISA試劑盒
一、實(shí)驗(yàn)原理
采用?雙抗體夾心法?:
微孔板預(yù)包被抗人CFH抗體捕獲樣本中的CFH
加入HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體形成復(fù)合物
TMB顯色(藍(lán)色→黃色),450nm測(cè)OD值,濃度與吸光度正相關(guān)
二、試劑盒組成
組分 規(guī)格(96T/48T) 保存條件
預(yù)包被微孔板 1×96孔/1×48孔 2-8℃
CFH標(biāo)準(zhǔn)品(凍干) 0.5mL×6管(0-40ng/mL) -20℃
HRP標(biāo)記抗體 6mL/3mL 2-8℃
TMB底物 9mL/6mL 避光4℃
20×洗滌緩沖液 25mL/15mL(需1:20稀釋) 室溫
三、樣本處理
血清/血漿?:3000×g離心10-20分鐘,避免溶血或脂血
組織勻漿?:生理鹽水研磨后離心取上清
保存要求?:-20℃分裝,避免反復(fù)凍融(≤3次)
四、操作步驟
平衡試劑?:所有組分室溫平衡20分鐘
標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶?:加0.5mL稀釋液溶解凍干標(biāo)準(zhǔn)品
加樣溫育?:
依次加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μL→檢測(cè)抗體50μL
37℃孵育60分鐘
洗滌?:手工洗板5次(每孔加滿(mǎn)洗滌液靜置1分鐘)
顯色?:加入TMB 100μL,避光反應(yīng)15分鐘
終止?:加終止液50μL,10分鐘內(nèi)測(cè)OD450nm
五、注意事項(xiàng)
靈敏度?:1.88-8.54ng/mL(不同品牌差異)
精密度?:板內(nèi)CV<10%,板間CV<15%
干擾因素?:避免細(xì)菌污染、反復(fù)凍融或劇烈震蕩樣本
失效判斷?:陰性對(duì)照OD值≥0.12需棄用
六、結(jié)果計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo)繪制曲線(xiàn),樣本濃度需乘以稀釋倍數(shù)。建議使用生工生物或艾美捷科技等供應(yīng)商提供的專(zhuān)業(yè)分析軟件。
注:不同品牌試劑盒參數(shù)可能存在差異,請(qǐng)以實(shí)際隨貨說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn)。
注:以上資料僅供參考,具體詳情來(lái)咨詢(xún)技術(shù) 老師或品牌供應(yīng)商。
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