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ELISA實驗?常見問題的綜合解答
以下是關(guān)于本生?ELISA實驗?常見問題的綜合解答,結(jié)合多個高可信度來源整理:
一、樣本處理與適用性?
非標準樣本類型?:
若樣本類型未在試劑盒說明書中標注,建議先進行預(yù)實驗驗證適配性,或直接聯(lián)系廠家獲取技術(shù)文獻支持?。
溶血影響?:
輕微溶血可通過?增加洗板次數(shù)?(如5次以上)降低背景值;嚴重溶血需重新取樣?。
凍融影響?:
反復(fù)凍融會導(dǎo)致蛋白降解,建議分裝保存(如每管100μL),避免多次凍融?。
二、樣本類型選擇?
樣本類型? ?適用場景? ?注意事項?
血清? 免疫檢測、生化分析 缺乏凝血因子,避免纖維蛋白干擾?
血漿? 凝血因子檢測、蛋白定量 需添加抗凝劑(如EDTA、肝素)?
三、實驗操作關(guān)鍵點?
包被與封閉?:
抗體/抗原需用包被緩沖液(pH 9.0–9.6)稀釋,37℃孵育2小時或4℃過夜?。
封閉步驟不可省略?,推薦使用牛血清白蛋白(BSA)或脫脂奶粉?。
洗滌與顯色?:
洗滌需(3–5次),避免殘留物干擾?。
顯色階段需避光,TMB底物反應(yīng)時間控制在10–30分鐘?。
常見問題排查?:
假陽性?:可能由試劑污染或洗板不充分引起?。
白板/顯色淡?:檢查抗體活性、孵育時間或底物失效?。
四、標準曲線與結(jié)果計算?
標準品需覆蓋預(yù)期樣本濃度范圍,相關(guān)系數(shù)(R2)應(yīng)≥0.99?。
終止液加入后15分鐘內(nèi)完成讀數(shù),避免信號衰減?。
如需進一步了解具體操作細節(jié),可觀看以下視頻教程:
以上內(nèi)容綜合了樣本處理、實驗操作及異常結(jié)果解析,確保實驗準確性。
注:以上資料僅供參考,不作為實驗依據(jù),具體產(chǎn)品資料請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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